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  • JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒 熒光探針染色
  • 型號:FS1169
  • 報價:1600
  • 地區:上海市
  • 0
  • JC-10 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒;;Rhodamine 123 羅丹明123;JC-1;JC-10;CCCP;JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒 熒光探針染色
  • 025-58690567
產品詳細介紹

JC-10 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒

產品信息

產品貨號產品名稱規格價格(元)
FS1169-100TJC-10 Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit  JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒100T1600.00 

JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒 熒光探針染色 JC-10線粒體膜電位檢測試劑盒 熒光探針染色?   

產品描述

線粒體膜電位熒光探針JC-10是JC-1的升級產品,同樣可用于檢測線粒體膜電位的變化。因JC-1雖然在許多實驗中被廣泛應用,但是其水溶性很差,即使在1 μM濃度的條件下,JC-1也會在水的緩沖液中析出。而JC-10具有更好的水溶性,可以在某些需要高濃度染料的實驗中替代JC-1。雖然在一些細胞系中JC-10有著比JC-1更好的表現,不過,JC-10的性能表現細胞依賴性特征。

正常細胞內,JC-10選擇性聚集在線粒體基質中形成可逆的紅色熒光聚合物(Ex=540 nm, Em=590 nm);不健康的線粒體由于膜電位的下降或喪失,JC-10由多聚體轉變為單體形式存在于胞漿中,產生綠色熒光(Ex=490 nm, Em=525 nm)。JC-10不僅可用于定性檢測,因顏色的變化可以非常直接的反映出線粒體膜電位的變化。也可以用于定量檢測,因線粒體的去極化程度可以通過紅/綠熒光強度的比例來衡量。這兩種顏色的變化可以用流式細胞儀上的標準濾光器檢測到,綠色熒光可用FL1通道分析,紅色熒光可用FL2通道分析。除了用于流式細胞術,也可以用于熒光成像和熒光酶標板檢測平臺。

本試劑盒中提供了陽性對照CCCP,其能誘導線粒體膜電位下降。對于六孔板中的樣品,本試劑盒共可以檢測100個樣品。

 運輸與保存方法

冰袋(wet ice)運輸。-20℃干燥避光保存,分裝,以避免反復凍融,一年有效。超純水和JC-10染色緩沖液(5×)也可4℃保存。

使用方法

1. JC-10染色工作液的配置

 取適量JC-10(200×),按照每50 μL JC-10(200×)加入8 mL超純水的比例稀釋,劇烈震蕩充分溶解并混勻JC-10,然后再加入2 mL JC-10染色緩沖液(5×),混勻后即為JC-10染色工作液。

2. 陽性對照的設置

取出試劑盒中供的CCCP(10 mM)按照1∶1000的比例加入到細胞培養液中,使其終濃度為10 μM,處理細胞20分鐘。隨后按照下述方法裝載JC-10,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數細胞,通常10 μM CCCP處理20分鐘后線粒體的膜電位會完全喪失,JC-10染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經JC-10染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料決定。

3. 細胞染色

3.1對于懸浮細胞

1)取1×105~6×105個細胞重懸于0.5 mL細胞培養液中(可以含血清和酚紅),加入0.5 mL JC-10染色工作液,顛倒混勻。

2)37℃孵育20分鐘。孵育期間,按每1 mL JC-10染色緩沖液(5×)加入4 mL蒸餾水的比例配制適量的JC-10染色緩沖液(1×),并置于冰浴,作為洗液。

3)37℃孵育結束后,600g  4℃離心3~4分鐘,棄上清,注意盡量不要吸除細胞。加入1 mL JC-10染色緩沖液(1×)重懸細胞,600 g, 4℃離心3~4分鐘,棄上清,重復一次。

4)用適量JC-10染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。

3.2對于貼壁細胞

1)對于6孔板,吸除培養液,根據具體實驗如有必要可用PBS或其它適當溶液洗滌細胞一次,加入1 mL細胞培養液(可

以含血清和酚紅)。

2)然后加入1 mL JC-10染色工作液,充分混勻。細胞培養箱中37℃孵育20分鐘。孵育期間,按每1 mL JC-10染色緩沖液(5×)加入4 mL蒸餾水的比例配制適量的JC-10染色緩沖液(1×),并放置于冰浴,作為洗液。

3)37℃孵育結束后,吸除上清,用JC-10染色緩沖液(1×)洗滌2次。

4)加入2 mL細胞培養液,培養液中可以含有血清和酚紅。在熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡下觀察。

【注】:對于貼壁細胞,如果希望采用熒光分光光度計或流式細胞儀檢測,可以先收集細胞,重懸后參考懸浮細胞的檢測方法。

3.3對于純化的線粒體

1)把配制好的JC-10染色工作液用JC-10染色緩沖液(1×)稀釋5倍。取5倍稀釋的JC-10染色工作液0.9 mL 加入0.1 mL總蛋白量為10~100 μg純化的線粒體。

2)用熒光分光光度計或熒光酶標儀檢測:混勻后直接用熒光分光光度計進行時間掃描(time scan),激發波長為485 nm,發射波長為590 nm。如果使用熒光酶標儀,激發波長不能設置為485nm時,可以在475~520nm范圍內設置激發波長。

4. 熒光觀測

檢測JC-10單體時可以把激發光設置為490 nm,發射光設置為530 nm;檢測JC-10聚合物時,可以把激發光設置為525 nm,發射光設置為590 nm。

【注】:此處測定熒光時不必把激發光和發射光設置在zui大激發波長和zui大發射波長。如使用熒光顯微鏡觀察,檢測JC-10單體時可以參考觀察其它綠色熒光時的設置,如觀察GFP或FITC時的設置;檢測JC-10聚合物時可以參考觀察其它紅色熒光,如碘化丙啶或Cy3時的設置。

注意事項

1)JC-10(200×)在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內,可以20~25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。

2)須把JC-10(200×)用試劑盒提供的超純水充分溶解混勻后才可加入JC-10染色緩沖液(5×)。不可先配制JC-10染色緩沖液(1×)再加入JC-10(200×),否則JC-10將很難充分溶解并會嚴重影響后續的檢測使用。

3)使JC-10染色緩沖液(1×)保持4℃左右,此時的洗滌效果較好。

4)JC-10探針裝載完并洗滌后盡量在30分鐘內完成后續檢測過程。在檢測前需冰浴保存。

5)請勿把JC-10染色緩沖液(5×)全部配制成JC-10染色緩沖液(1×),本試劑盒使用過程中需直接使用JC-10染色緩沖液(5×)。

6)如果發現JC-10染色緩沖液(5×)中有沉淀,必須全部溶解后才能使用,為促進溶解可以在37℃加熱。

7)CCCP為線粒體電子傳遞鏈抑制劑,有毒,請注意小心防護。

8)為了您的an全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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