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  • PEI轉染試劑在日常使用上需注意以下四點
  • 點擊次數:1977 發布時間:2021-01-26
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  •   PEI轉染試劑由納米高分子聚合物組成,分子內含有許多氨基,在生理PH下會發生質子化,這些質子化的氨基可以中和DNA質粒表面的負電荷,使DNA分子由伸展結枸壓縮為體積相對較小的DNA粒子,并包包裹在其中,使DNA免受核破醇的降解。轉染復合物主要是通過細胞內吞作用將DNA轉移進入細跑,形成內合體,DNA從內會體釋放,進入細胞質中,再進一步進入核內轉錄、表達。通過納米技術生產出的PEI轉染試劑在納米尺度表現出結合保護DNA能力強、毒性低的獨特性能。
     
      PEI轉染試劑的注意事項:
      1、質粒質量:請務必使用高純度無內毒素轉染級質粒。通過260nm光吸收測定DNA 濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性。
      2、細胞條件:使用適當保存和經常傳代的健康細胞。確保細胞沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者李記生物的胎牛血清培養細胞。
      3、細胞培養液要求:PEI轉染試劑可用于有血清培養基的轉染,并且轉染前不需要換培養基。但是,制備轉染復合物時要求用無血清培養基稀釋DNA和轉染試劑,因為血清會影響復合物的形成。確保細胞培養液沒有被細菌、真菌或支原體污染。轉染時培養液中不添加抗生素。
      4、DNA濃度和PEI轉染試劑量的優化:DNA濃度和轉染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響,初次使用應優化DNA濃度和轉染試劑量以得到大的轉染效率。使用者可嘗試每 1 μg DNA使用1~4μL體積線性PEI轉染試劑進行優化。DNA和轉染試劑的比例,通常推薦是1:2~1:5。
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